ЛАБОРАТОРИЯ АТЕРОТРОМБОЗА
+7(495)915-38-87

г. Москва, ул. Яузская, д. 11/6, корпус 12




Основные результаты

В результате выполнения научно-исследовательской работы лаборатории был разработан оригинальный метод выделения внеклеточных везикул различного происхождения и их индивидуальной оценки с помощью многоцветовой проточной цитометрии. C помощью разработанного нами метода впервые было определено содержание и показано преобладание различных типов внеклеточных везикул, в том числе тромбоцитарного происхождения, у пациентов с ИБС по сравнению со здоровыми добровольцами.

Нами была отработана методика выделения клеток из атеросклеротических бляшек с сохранением их поверхностных маркеров, с помощью которой был исследован полный фенотипический состав субтипов лейкоцитов в крови и в атеросклеротических бляшках человека с учетом степени дифференцировки и активации лимфоцитов. Была доказана повышенная активация Т-лимфоцитов внутри атеросклеротических бляшек по сравнению с кровью тех же пациентов.

Впервые нами исследовано качественное и количественное содержание ДНК герпес-вирусов человека (типы 1-8) в атеросклеротических бляшках различных типов, в интактных участках сосудистой стенки, а также в крови из различных сосудистых бассейнов. Была показана повышенная активность цитомегаловирусной инфекции у пациентов с острыми формами ИБС по сравнению со здоровыми добровольцами. Также с помощью разработанной методики культивирования эксплантов атеросклеротических бляшек человека ex vivo была проведена оценка содержания герпес-вирусов не только на момент изъятия участков сосудов из организма, но и в процессе культивирования атеросклеротических бляшек в лабораторных условиях.

В ходе изучение активации герпесвирусной инфекции в крови нами выявлено преобладание активной ЦМВ-инфекции у пациентов с острым коронарным синдромом по сравнению со здоровыми добровольцами и были продолжены работы по изучению роли герпесвирусной инфекции в процессе дестабилизации атеросклеротических бляшек. В результате работы было выявлено преобладание вирусов герпеса 2, 5, 6, 7 и 8 типов у пациентов с различными формами ИБС по сравнению со здоровыми добровольцами. При динамическом наблюдении было показано, что степень активности вирусов герпеса человека сохраняется на одном уровне в течение месяца после эпизода обострения ИБС для ЦМВ, однако для остальных типов герпес-вирусов отмечается тенденция к снижению уровня вирусной нагрузки. На следующем этапе планируется проведение дополнительной оценки активности герпес-вирусной инфекции в течение года после развития острого коронарного синдрома.

Было подтверждено, что у пациентов с острыми формами ИБС достоверно повышен уровень воспалительного маркера С-реактивного белка, а также снижены результаты теста эндотелий-зависимой вазодилатации плечевой артерии по сравнению со здоровыми добровольцами. Мы выявили, что у пациентов с различными формами ИБС и здоровых добровольцев результаты теста эндотелий-зависимой вазодилатации плечевой артерии отрицательно коррелируют с концентрацией активного цитомегаловируса и герпесвирусов 2, 7 и 8 типов в крови. При этом результаты теста эндотелий-зависимой вазодилатации плечевой артерии также достоверно отрицательно коррелируют с уровнем С-реактивного белка и положительно коррелируют с кровотоком в коронарных артериях, определенным по данным инвазивной ангиографии. Был проведен анализ долгосрочного прогноза заболевания у групп пациентов и здоровых добровольцев, включенных на предыдущих этапах работы. Было определено, что у пациентов с различными формами ИБС комбинированная конечная точка сердечно-сосудистой заболеваемости и сердечно-сосудистая смертность были достоверно выше, чем у здоровых добровольцев, что соответствовало более высокому уровню активного цитомегаловируса у данных пациентов.

У пациентов с герпес-вирусной инфекцией выявлено преобладание количества внеклеточных везикул тромбоцитарного происхождения по сравнению со здоровыми добровольцами. Достоверных различий в концентрации эндотелиальных внеклеточных везикул выявлено не было. В группах пациентов с острыми формами ИБС и здоровых добровольцев обнаружены ранее не описанные в литературе популяции экстраклеточных везикул фенотипа CD42a+CD81+. Планируется дальнейшее изучение данной популяции.

При применении методик, улучшающих функции эндотелия, отмечалось уменьшение количества как тромбоцитарных, так и эндотелиальных внеклеточных везикул у пациентов с острым инфарктом миокарда, однако подобные изменения не возникали у группы здоровых добровольцев и у пациентов с острыми формами ИБС, которым не проводилось воздействия на функции эндотелия и у которых отмечалось в дальнейшем более тяжелое госпитальное течение ИБС. Наличие всех типов герпес-вирусов, кроме 6 типа, достоверно не коррелировало с наличием в крови пациентов интерлейкина 10 и интерлейкина 6, что могло быть связано с низким уровнем вирусемии, не приводившим к системному иммунному ответу на инфекцию, что характерно для герпес-вирусной инфекции.

В рамках научно-исследовательской работы были проведены проведены исследования по определению антигенной специфичности активированных Т-лимфоцитов. Создана уникальная база данных секвенирования CDR3 регионов CD4 и CD8 Т лимфоцитов у пациентов с атеросклерозом. Обнаружено, что репертуар CD8 Т лимфоцитов обладает более высокой вариабельностью по сравнению с репертуаром рецепторов CD4 Т лимфоцитов. База данных подготовлена к внесению в публичную базу данных нуклеотидных последовательностей BLAST.

Среди созданной базы данных CDR3 регионов были выявлены описанные в литературе специфичные к цитомегаловирусу CDR3 клоны. При анализе базы данных подтверждено преобладание клонов семейства TRBV 5-1 в ткани атеросклеротических бляшек в сравнении с кровью тех же пациентов. Учитывая ограничение ответа CD8 Т клеток на представление им MHC-класс I антигена, уникальность репертуара их рецепторов может быть связана с активацией в ответ на презентацию им пептидов цитомегаловируса. Важно отметить, что цитомегаловирус при попадании в организм человека также синтезирует гомолог MHC-класс I антигена, на которым возникает ответ CD8 Т лимфоцитов.

Результаты научной работы были опубликованы в российских и зарубежных высокорейтинговых журналах и доложены на конференциях.